苏州pg游戏股份有限公司 - 官方网站

Fc融合蛋白是一类通过基因工程构建的重组分子，典型的构建方式是将目标蛋白融合在Fc段的氨基端，替代单克隆抗体分子的Fab部分（如图1）。所得的融合蛋白为同源二聚体，包含两个配体结合结构域多肽，并保留了 IgG Fc段的效应功能，因此Fc融合蛋白的下游纯化可采用蛋白A亲和捕获作为第一步。

图1. Fc融合蛋白的构建示意图*

配体结合结构域可来源于受体胞外结构域、细胞因子、酶、毒素、多肽等，不同的结构域构成了Fc融合蛋白的功能多样性。人IgG1的Fc区可与FcγR和C1q结合，因此融合蛋白可潜在诱导抗体依赖的细胞介导的细胞毒性（ADCC）、补体依赖的细胞毒性（CDC）；FcRn与Fc区的结合则负责延长融合分子的血清半衰期。Fc融合蛋白与单抗在结构上的根本区别，使其纯化过程更复杂、更具挑战性，需要针对性的纯化工艺开发和优化。

图2. Fc融合蛋白的功能多样性*

Fc融合蛋白的纯化工艺

相较于单抗药物的经典“亲和捕获+阴阳离子精纯”三步层析路线”，Fc融合蛋白由于融合部分（受体、细胞因子、酶等）的理化性质差异极大，导致层析条件、杂质去除策略（宿主蛋白、内毒素、产品相关杂质）等需要单独优化，对填料也提出了更高的要求。下面我们将从捕获阶段和精纯阶段分别探讨Fc融合蛋白与单抗的工艺细节和纯化要求差异。

捕获阶段

精纯阶段

pg游戏 针对Fc融合蛋白特点推荐两种纯化路线

路线一

亲和+阴离子结合洗脱+疏水流穿；

适用于等电点低（一般小于5）的样品

路线二

亲和+阳离子结合洗脱+阴离子流穿/疏水流穿；

适用于等电点高（一般大于6）的样品

结合洗脱主要去除大小变异体，比如片段、聚集体、电荷异构体；

流穿模式主要去除HCP、HCD等杂质；

由于样品的分子结构、等电点、杂质分布、质量要求等差异化特点，推荐路线根据具体情况具体分析，由于样品的复杂性，适用情况也仅针对一般规律，非一概而论。

对于亲和填料，当样品分子量小于100 kDa时，优先推荐MabPurix A65 Excel和MabPurix Infinite A，MabPurix Infinite A填料键合新一代高耐碱性Protein A配基，在线清洗（CIP）可耐受0.5~1.0 M NaOH，CIP条件为0.5 M NaOH的寿命实验验证可使用150 cycles以上，尤其适用于碱性条件要求高的复杂抗体类项目；

当样品分子量大于100 kDa时，推荐MabPurix P45。

01 亲和填料技术参数

02 阴离子交换填料技术参数

03 阳离子填料技术参数

04 疏水填料技术参数

应用案例

样品信息：分子量：180 kDa，尺寸较大，pI：6.0-6.5，

层析工艺

第一步：亲和捕获：MabPurix P45；10%FT DBC：26 g/L

第二步：阴离子交换层析：Monomix Mab60-Q

第三步：疏水层析：Polar MC30-HIC Butyl

该双抗尺寸较大，稳定性差，低pH易聚集；筛选亲和填料时发现，使用软胶（琼脂糖基质）填料载量较低，因此推荐使用聚合物基质的MabPurix P45填料；初次筛选时对比MabPurix P5与某进口填料X的使用效果，MabPurix P45的10%FT DBC为26 g/L，某进口填料X的10%FT DBC为15 g/L，因此选择MabPurix P45作为第一步层析步骤。

针对样品特点，pg游戏 推荐亲和+阴离子+疏水的层析工艺，三步层析之后样品纯度达到98.7%，蛋白A配基及HCP含量大幅度降低，聚集体得到有效控制。

订购信息

注：包装规格为1 L，5 L, 10 L, 50 L，预装柱规格为1 mL, 4.2 mL, 5 mL

*参考文献：

[1] Angela L. Linderholm and Steven M. Chamow. Immunoglobulin Fc-Fusion Proteins, BioProcess International,2014,10

互动有礼

已购买且使用过pg游戏 填料的客户欢迎参与满意度问卷活动，参与有礼，数量有限，先到先得！